1.Co je buněčná kultura?
Buněčná kultura označuje odstranění buněk ze zvířat nebo rostlin a jejich následné pěstování v příznivém umělém prostředí.Buňky mohou být odebrány přímo z tkáně a rozloženy enzymatickými nebo mechanickými prostředky před kultivací, nebo mohou být odvozeny ze zavedených buněčných linií nebo buněčných linií.
2.Co je primární kultura?
Primární kultura se týká kultivačního stadia poté, co jsou buňky odděleny od tkáně a proliferují za vhodných podmínek, dokud neobsadí všechny dostupné substráty (to znamená, že nedosáhnou konfluence).V této fázi musí být buňky subkultivovány jejich přenesením do nové nádoby s čerstvým růstovým médiem, aby se poskytlo více prostoru pro pokračující růst.
2.1 Buněčná linie
Po první subkultivaci se primární kultura nazývá buněčná linie nebo subklon.Buněčné linie odvozené z primárních kultur mají omezenou životnost (tj. jsou omezené; viz níže) a jak procházejí, dominují buňky s nejvyšší růstovou kapacitou, což má za následek určitý stupeň genotypu v populaci konzistentní s fenotypem.
2.2 Buněčný kmen
Pokud je subpopulace buněčné linie pozitivně vybrána z kultury klonováním nebo nějakou jinou metodou, buněčná linie by se stala buněčným kmenem.Buněčné kmeny obvykle získávají další genetické změny po zahájení rodičovské linie.
3. Omezené a kontinuální buněčné linie
Normální buňky se obvykle dělí jen omezeně, než ztratí schopnost proliferovat.Jedná se o geneticky podmíněnou událost zvanou senescence;tyto buněčné linie se nazývají konečné buněčné linie.Některé buněčné linie se však stávají nesmrtelnými prostřednictvím procesu zvaného transformace, který může nastat spontánně nebo může být vyvolán chemikáliemi nebo viry.Když konečná buněčná linie projde transformací a získá schopnost se neomezeně dělit, stane se kontinuální buněčnou linií.
4. Stav kultury
Kultivační podmínky každého typu buněk jsou velmi odlišné, ale umělé prostředí pro kultivaci buněk je vždy složeno z vhodné nádoby, která obsahuje:
4.1 Substrát nebo kultivační médium, které poskytuje základní živiny (aminokyseliny, sacharidy, vitamíny, minerály)
4.2 Růstové faktory
4.3 Hormony
4.4 Plyny (O2, CO2)
4.5 Regulované fyzikální a chemické prostředí (pH, osmotický tlak, teplota)
Většina buněk je závislá na ukotvení a musí být kultivovány na pevném nebo polotuhém substrátu (adherentní nebo monovrstvá kultura), zatímco jiné buňky mohou růst plovoucí v médiu (suspenzní kultura).
5.Kryokonzervace
Pokud je v subkultuře nadbytek buněk, měly by být ošetřeny vhodným ochranným prostředkem (jako je DMSO nebo glycerol) a skladovány při teplotě nižší než -130 °C (kryokonzervace), dokud nejsou potřeba.Pro více informací o subkultivaci a kryoprezervaci buněk.
6.Morfologie buněk v kultuře
Buňky v kultuře lze na základě jejich tvaru a vzhledu (tj. morfologie) rozdělit do tří základních kategorií.
6.1 Fibroblastové buňky jsou bipolární nebo multipolární, mají protáhlý tvar a rostou připojené k substrátu.
6.2 Buňky podobné epitelu jsou polygonální, mají pravidelnější velikost a jsou připojeny k matrici v samostatných listech.
6.3 Buňky podobné lymfoblastům jsou kulovité a obvykle rostou v suspenzi bez přichycení k povrchu.
7.Aplikace buněčné kultury
Buněčná kultura je jedním z hlavních nástrojů používaných v buněčné a molekulární biologii.Poskytuje vynikající modelový systém pro studium normální fyziologie a biochemie buněk (jako je metabolický výzkum, stárnutí), účinků léků a toxických sloučenin na buňky a mutageneze a karcinogenních účinků.Používá se také pro screening a vývoj léků a výrobu biologických sloučenin ve velkém měřítku (jako jsou vakcíny, terapeutické proteiny).Hlavní výhodou použití buněčné kultury pro kteroukoli z těchto aplikací je konzistence a reprodukovatelnost výsledků, které lze získat pomocí šarže klonovaných buněk.
Čas odeslání: Jun-03-2019